作业帮基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/05 22:37:58
基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时
基因克隆实验
克隆实验问题
1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.
2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时左右,以菌落长到直径1-2毫米为止；再挑3-5个单克隆放大培养24小时左右.
3、裂解菌体后,4°C ,12 000 g ,离心20-30分钟,取上清液.
4、PCR检测所得裂解后上清液（引物为M13-47,RV-M）,得到了目的片段大小的产物（稍长些）.
5、送菌液上清液测序（使用通用引物M13-47）,但是测序结果却是如下其概况：在载体插入点之间的序列BLAST后,显示为杆菌等细菌的片段,共送了16个样品均是如此（本实验应该是动物的序列）,看来不是空载,难道是载体连接上了细菌的一段序列,为什么会插入细菌片段呢,而且长度就这么巧!还是其他什么原因呢,恳请赐教!
基因克隆实验克隆实验问题 1、以cDNA为模板做PCR反应,得到的产物和预期的长度一样.2、再用pMD-19载体连接目的片段,之后液体LB（含氨苄）200转震荡培养1-2小时,取300微升倒在LB平板培养24小时
目的基因是动物的相关基因片段PCR扩增的吗?你采用mRNA还是DNA啊?是扩增16SrDNA?不然怎么会显示杆菌的片段?BLAST比对如此奇怪?应该不会插入错误16组,估计实验操作的问题,或者使用NCBI比对生物信息时有误.说的够概况的,不太清楚,也很好奇,能不能步骤表述详细点?
一个好办法,克隆的菌落可以甘油保藏后直接送去测序,但是要告诉测序公司是甘油管样品.这样就可以看看是不是你前面的步骤有误或污染了.
你在做细菌培养的时候肯定是受到污染了。
不明白为什么是送菌液的上清液测序？应该是送检含有培养基的细菌培养物啊。。。。
你需要仔细检查你的实验过程有没有被污染的环节。例如挑选的单克隆是否是阳性？ 是否选了假阳性的？
第四步没有必要裂解菌体取上清做菌检。直接检测就可以啊...
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你在做细菌培养的时候肯定是受到污染了。
不明白为什么是送菌液的上清液测序？应该是送检含有培养基的细菌培养物啊。。。。
你需要仔细检查你的实验过程有没有被污染的环节。例如挑选的单克隆是否是阳性？ 是否选了假阳性的？
第四步没有必要裂解菌体取上清做菌检。直接检测就可以啊
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用同种限制酶切割片段当然会插入细菌基因片段了