怎样设计RT PCR引物RT步骤里的OLIG（dt）和PCR步骤里的引物都需要设计吗?怎么设计呢?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/29 11:24:28
怎样设计RT PCR引物RT步骤里的OLIG（dt）和PCR步骤里的引物都需要设计吗?怎么设计呢?

怎样设计RT PCR引物RT步骤里的OLIG（dt）和PCR步骤里的引物都需要设计吗?怎么设计呢?
怎样设计RT PCR引物
RT步骤里的OLIG（dt）和PCR步骤里的引物都需要设计吗?怎么设计呢?

怎样设计RT PCR引物RT步骤里的OLIG（dt）和PCR步骤里的引物都需要设计吗?怎么设计呢?
Oligo dt不需要设计,用试剂盒里面的就行.如果你RT的引物想用自己的,那你需要扩增的基因序列应该是明确的吧.RT的时候'引物没太多的选择性,mRNA序列跟反义链配对,因此RT的引物要根据正义链 （就是通常描述基因序列的那条链）3'末端往5'末端的顺序来合成.需要注意通过控制引物的长度,控制Tm,毕竟反转录反应都在42℃进行的.
PCR用的引物建议使用primer primer等软件来设计.首先自己估算你目标条带的Tm值,然后在软件里面设定引物的Tm为目标的Tm附近,通常引物与模板配对区长度在20-25bp,扩增长度超过10k的话引物中与模板配对的要延长到30bp或更长,扩增长度、自由能、二聚体等要求就按照软件列出做填空就行了.最后,软件会给出一些引物对选择,你自己选择上下游引物Tm差值小的、二聚体和cross dimer以及false priming情况可以接受的那对引物组合.
空说太空泛了,需要的话跟我给我发消息,然后mail联系.

怎样设计RT PCR引物RT步骤里的OLIG（dt）和PCR步骤里的引物都需要设计吗?怎么设计呢? rt pcr的引物设计 如何设计rt-pcr 引物?怎样鉴别基因内的intron and extron? PCR的引物怎样设计, 转基因株系怎样通过设计半定量 RT-PCR的引物区分内源表达与外源表达? 根据RNA序列设计的RT-PCR一对引物中为什么有一个同源引物,一个互补引物呢? PCR引物的成分是什么RT RT-PCR的引物如何设计?本人刚接触RT-PCR,需要从其它几个物种基因的保守序列中,设计出另一个物种这个基因RT-PCR引物,但是实在是一头雾水, 做RT-PCR设计引物时,找引物序列有哪些好方法? 引物分哪几种?扩基因所用的引物和做RT-PCR的引物一样吗? RT-PCR和巢式RT-PCR的引物有区别吗 实时荧光定量PCR 的引物能不能用来做RT RT-PCR根据什么序列设计引物是根据cDNA序列设计引物吗?要不要加上3‘UTR的序列? 半定量RT-PCR设计引物时产物长度为多少合适我说的是产物长度的限制哦 我买的RT-PCR两步法试剂盒里有随机引物还有Oligo(dT)用哪个好呢 RT-PCR与时时PCR的原理及引物有什么区别? PCR的引物怎样选取? RT-PCR实验 为什么RT只加反义引物PCR要加正义引物和反义引物