作业帮如何稀释实时荧光定量PCR的引物?我马上要做实时荧光定量PCR了,引物已经获得,引物管上面的标注是：OD=2,nmoles=9.96,现在我要把引物干粉溶解成100pmol/ul的储备液,请问我该加入多少微升RNase-free d
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/30 03:05:54
如何稀释实时荧光定量PCR的引物?我马上要做实时荧光定量PCR了,引物已经获得,引物管上面的标注是：OD=2,nmoles=9.96,现在我要把引物干粉溶解成100pmol/ul的储备液,请问我该加入多少微升RNase-free d
如何稀释实时荧光定量PCR的引物?
我马上要做实时荧光定量PCR了,引物已经获得,引物管上面的标注是：OD=2,nmoles=9.96,现在我要把引物干粉溶解成100pmol/ul的储备液,请问我该加入多少微升RNase-free ddH2O
如何稀释实时荧光定量PCR的引物?我马上要做实时荧光定量PCR了,引物已经获得,引物管上面的标注是：OD=2,nmoles=9.96,现在我要把引物干粉溶解成100pmol/ul的储备液,请问我该加入多少微升RNase-free d
1纳摩尔（nmol）=1000皮摩尔（pmol）
9.96nmol/X=100pmol/ul
解出X=99.6ul
答：加入100微升vddH20
PS.一般我们买回引物,管它那么多,都加100微升水用着,没啥问题- -
你确定你要的是pm级的??如果你确定,那就是要加99.6微升的水,记住,溶解之前一定要高速离心两分钟,开盖的时候要小心,避光,用锡箔纸包住
1纳摩尔（nmol）=1000皮摩尔（pmol）
9.96nmol/X=100pmol/ul
解出X=99.6ul
答：加入100微升vddH20
100pmol/ul= 100umol/L= 100uM (Standard stock concentration of PCR Oligos)
V= 摩尔体积/摩尔浓度= 9.96nmol/100uM= 9.96nmol/ (100umol/L)=
9.96nmol/ (100000nmol/L)= 0.0000996L= 99.6ul
Hence, add 99...
全部展开
100pmol/ul= 100umol/L= 100uM (Standard stock concentration of PCR Oligos)
V= 摩尔体积/摩尔浓度= 9.96nmol/100uM= 9.96nmol/ (100umol/L)=
9.96nmol/ (100000nmol/L)= 0.0000996L= 99.6ul
Hence, add 99.6ul Rnase-free ddH2O.
对任意PCR引物，正确加水体积应为V(ul)=N (nmol)*10,即浓度为100uM. ie,9.96*10= 99.6ul
注：一般情况下，所有PCR引物的stock concentration都是100uM. 使用时将其稀释十倍为10uM进行PCR反应。
另：拿到PCR引物后，应先13.2k rpm离心一分钟，加入65摄氏度预热ddH2O配置成100umol溶液，再65摄氏度水浴1分钟后储藏。
再注：一楼为山寨加水法，千万不要学习。我不知道中国的生物公司，像IDT这种公司作出的引物，由于序列差异，摩尔浓度相差还是很多的。我曾经订过100bp+ 的引物，和20bp+的引物完全不是一回事...
收起