增加PCR特异性有什么方法?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/09 11:26:17
增加PCR特异性有什么方法?

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增加PCR特异性有什么方法?
引物的另一个重要参数是熔解温度（Tm）.这是当50％的引物和互补序列表现为双链DNA分子时的温度.Tm对于设定PCR退火温度是必需的.在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还要足够高,以减少非特异性结合.合理的退火温度从55℃到70℃.退火温度一般设定比引物的Tm低5℃.设定Tm有几种公式.表4列出确定引物Tm最常用的两种方法.第一个公式来源于高盐溶液中的杂交,适用于小于18碱基的引物.第二个公式根据GC含量估算Tm.确定引物Tm最可信的方法是近邻分析法.这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性.大部分计算机程序使用近邻分析法.生物帮上面有这方面的详细内容,DNA片段纯化 http://product.bio1000.com/100249/

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