如何用光敏生物素标记质粒?要求有步骤,注意事项,

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/05 23:49:18
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如何用光敏生物素标记质粒?
要求有步骤,注意事项,

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生物素化质粒ds-DNA：将含质粒pBR332的大肠杆菌在含氨苄青霉素的LB培养基中扩增,取纯培养物用MagicTM DNA纯化系统,按Promega公司所附操作说明书提取质粒ds-DNA.取纯化的不含单链DNA的大肠杆菌质粒ds-DNA直接与长臂光敏生物素混合,用光标记灯进行光照标记,以制备生物素化质粒ds-DNA.可参考以下步骤：在一灭菌EP管中加待标记DNA 5ug／10uL,在暗室中加入5ug／uL光敏生物素,充分混匀,置冰浴中.

在特制光源下10cm处照射20min.加入100mmol／LTris-HCl,pH9．0(含0．1mmol／LEDTA)10uL,混匀.再加入等体积仲丁醇,混匀.离心lmin(10 000r／rain),吸去上层仲丁醇,弃去.再加入仲丁醇25uL,重复提取游离的光敏生物素.吸去上层无色仲丁醇后,加入5uL3mol／L醋酸钠,充分混匀,加入冷无水酒精100gL充分混匀,沉淀标记的DNA,置-20℃过夜(或-70℃l5min),15 000r／min离心20min,沉淀物再用70％乙醇洗1次,离心,抽干,溶于0．1mmol／LEDTA或TK中,测定探针浓度,分装,保存于-20℃.

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